在马云飞与高寒的婚礼庆典当日,一位神秘访客突兀现身——昔日"五号特工组"的挚友老于,手持密令请求二人再度携手,追踪窃取美国核武器机密的双重间谍吉川猛夫。这场原本应是温馨的婚礼,此刻却因突如其来的任务请求而笼罩阴云。
为此,高寒假意成为落跑新娘,跟随欧阳剑平与李智博前往云南执行任务,马云飞和何坚也因局势被迫出山,五号特工组五位成员——语言专家欧阳剑平、爆破专家李智博、特工马云飞、密码专家高寒以及“神偷”何坚再次集结投入前线。与此同时,日本方面派出王牌间谍酒井朝香,作为酒井美惠子的妹妹,她以更加狠辣的手腕展开行动。
五号特工组初战不利,被吉川猛夫尚未暴露的同伙陷害入狱,不得已集体越狱。他们一面躲避美军追捕,一面追查吉川猛夫的行踪,最终揭露了美军内部的叛徒,并抢先找到失窃的核武器资料。
战事加剧,前线士兵爆发大规模病毒感染,五号特工组受命调查,却与病毒源头桥本擦肩而过。这位痴迷科学实验的怪人将高寒作为试验品绑架,一路严密保护其研究。马云飞、李智博与何坚深入滇缅边境,历经丛林追击战,最终潜入缅甸境内的生化基地。高寒为获取病毒血清,冒险拯救前线战士,险些丧命。
战况紧急,正面战场物资匮乏。蒋介石觊觎阎锡山早年藏匿的军火,阎锡山以建造者李阳失踪为由拒绝提供支援。戴笠再次求助五号特工组,派遣成员潜入山西寻找李阳下落。五号利用日军司令风间义博对中国画的喜好,策反其以蒋介石家中的古画为诱饵。通过变卖画作,成功渗透日军司令部,获取晋中会战记录与花名册。酒井朝香亦现身现场,马云飞巧妙周旋,最终在被识破前脱身。
五号特工组将宋美龄珍藏的国画送回重庆,准备归还。然而刚下飞机便遭遇变故——美国飞虎队队长陈纳德在机场遇袭。五号成员被戴笠与老于拦截,只得从枪击现场入手调查。借助物理、枪械知识和心理推理,他们还原现场并瓦解日本刺杀阴谋。真相揭晓后,五号奉命保护陈纳德安全。
陈纳德夫人为确保安全,邀请美国顾问罗特协助。然而罗特对五号行动频频指责,意外事件频发导致小组屡陷被动。最终,马云飞等人发现所有阴谋的幕后黑手竟是冒牌顾问罗特。五号特工组在缅甸接到孙立人将军的紧急任务,需将重要河道图送往前线,同行的记者崔媛媛实为酒井朝香的伪装,企图混入远征军基地配合轰炸。唯有高寒识破崔媛媛身份,其余成员却因猜疑而未能及时警觉。当众人相继落入酒井设下的陷阱,基地即将遭轰炸之际,长期缺席的欧阳剑平携陈纳德的救援力量赶到。酒井朝香最终遭遇与姐姐相同的命运,五号特工组重聚,却因高寒与马云飞的情变而走向分裂。
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